Nova Biologica Reperta

fa بررسی مقایسه‌ای چند روش آزمایشگاهی برای جداسازی اگزوزوم‌های شیر گاو Comparative study of several laboratory methods for isolating exosomes from bovine milk بیوتکنولوژی Biotechnology مقاله پژوهشی Original Article <div style="text-align: justify;">امروزه اگزوزومهای شیر به جهت دردسترس بودن و کارایی بسیار در محصولات آرایشی- بهداشتی و همچنین به عنوان نانوحاملهای دارویی، بسیار مورد توجه محققین قرار گرفته است. از آنجایی که یافتن روشی ساده و کارآمد برای جداسازی این وزیکولها بسیار بااهمیت است، در این پژوهش به برخی روشهای جداسازی اگزوزوم از شیر گاو مانند اولتراسانتریفیوژ، جداسازی با استفاده از پلیمر PEG و چند کیت تجاری داخلی پرداخته و مشخصهیابی اگزوزومها با استفاده از DLS و میکروسکوپ الکترونی انجام شده است. در روش اولتراسانتریفیوژ، به عنوان رایجترین روش جداسازی اگزوزوم، تعداد ذرات مشاهدهشده در تصاویر میکروسکوپ الکترونی بسیار پایین (۵±۲ پارتیکل در هر تصویر با بزرگنمایی تقریبی x ۶۰۰۰۰) برآورد شد، درحالی که در تصاویر میکروسکوپی کیت اگزوسان، تعداد ذرات زیادی (۱۵۰±۳۰پارتیکل در هر تصویر با بزرگنمایی تقریبی x ۳۰۰۰۰۰) قابل مشاهده بود. در جداسازی با استفاده از PEG، میانگین قطر ذرات با تکنیک DLS، ۲۶۳ نانومتر و بیشتر از روشهای اولتراسانتریفیوژ، کیت اگزوسیب و کیت آنااگزو که قطر ذرات به ترتیب ۱۷۶، ۱۴۲ و ۱۲۳ نانومتر بود، مشاهده گردید. میانگین قطر ذرات در تصاویر میکروسکوپی کیت اگزوسان، ۱۰±۷۰-۳۰ نانومتر بود که نتایج DLS هم کوچکبودن سایز ذرات جداسازیشده را تأیید کرد. با توجه به تعداد زیاد ذرات ریز (nm ۳۰ ≥) در نتایج میکروسکوپی کیت اگزوسان، این احتمال میرود که چنین ذراتی به وفور در شیر وجود دارند و ممکن است روشهای دیگر قادر به جداسازی این ذرات ریز نبودهاند. در نهایت هر چند تمامی روشهای مطالعه شده، قابلیت جداسازی اگزوزوم از شیر را داشتند ولی برای مقایسه دقیقتر و معرفی یک روش استاندارد برای جداسازی اگزوزوم از شیر گاو، لازم است مطالعات گسترده تری صورت پذیرد.</div>   Recently, milk exosomes have attracted much attention from researchers due to their availability and efficiency in cosmetic products and also as drug delivery nanocarriers. Since it is very important to find a simple and efficient method to purify these vesicles, in this research some methods of exosome isolation from bovine milk such as ultracentrifugation, using PEG polymer and several commercial kits were discussed and characterized. Detection of exosomes has been done using DLS and electron microscopy. In ultracentrifugation, as the most common method of exosome isolation, the number of particles in the electron microscope images was estimated to be very low (5 ± 2 particles), while in the microscopic images of the Exosun kit, a large number of exosomes (150 ± 30 particles) was visible. In PEG precipitation, the average diameter of the particles in DLS results was 263 nm and more than the ultracentrifugation, Exocib and Anaexo kit, where the diameter of the particles was 176 nm, 142 nm, and 123 nm, respectively. The average diameter of the particles in the microscopic images of the Exosun kit was 30-70±10 nm, and DLS results confirmed the small size of the isolated particles. Considering the large number of small particles (≥ 30nm) in the microscopic results of the exosun kit, other methods may not have been able to isolate these small particles. Finally, although all the studied methods were able to isolate exosome from milk, more extensive studies are necessary to make a more accurate comparison and to introduce a standard method for isolating exosome from bovine's milk.   اگزوزوم, اولتراسانتریفیوژ, رسوب‌دهی با پلیمر, شیر, وزیکول‌های خارج‌سلولی exosome, extracellular vesicles, milk, polymer precipitation, ultracentrifugation 22 40 http://nbr.khu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1546-1&slc_lang=fa&sid=1 Hanieh Ghandchi حانیه قندچی haniehghandchi@gmail.com 100319475328460010666 100319475328460010666 No Alzahra University دانشگاه الزهرا Reihaneh Ramezani ریحانه رمضانی re.ramezani@alzahra.ac.ir 100319475328460010667 100319475328460010667 Yes Alzahra University دانشگاه الزهرا Zahra Moosavinejad سیده زهرا موسوی نژاد z.moosavinejad@alzahra.ac.ir 100319475328460010668 100319475328460010668 No Alzahra University دانشگاه الزهرا