fa مطالعه‌ سینتیکی آنزیم پراکسیداز در حضور آلکالوئیدهای پورینی علوم سلولی و مولکولی Cell and Molecular Biology مقاله پژوهشی Original Article <strong><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">&nbsp;</span></span></strong><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">آنزیم پراکسیداز واکنش‌های اکسیداسیونی پیش‌ماده‌های مختلف را با استفاده از هیدروژن پراکسید که یک گونه فعال اکسیژنی است، تسریع می‌کند. </span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">گونه</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">‌</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">های فعال اکسیژن در غلظت</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">‌</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">های کم، به عنوان پیام‌رسان در تنظیم مسیرهای درون سلولی عمل می‌کنند و در غلظت‌های زیاد، با ایجاد استرس اکسیداتیو قابلیت غلبه بر سیستم ایمنی را دارند</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">.</span></span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> از طرفی، </span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">نوشیدنی‌هایی مثل قهوه، چای و نوشابه‌های گازدار که به مقدار فراوان در رژیم غذایی روزانه افراد وجود دارند، حا</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">وی مقادیر زیادی از آلکالوئید گزانتین‌ها از جمله تئوفیلین و تئوبرومین هستند. </span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">از این‌رو</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">، تأثیر تئوفیلین و تئوبرومین بر فعالیت پراکسیداز بررسی شده است. فعالیت پراکسیداز به روش کینتیک توسط اسپکتروفتومتر از طریق دنبال‌کردن جذب محصول رنگی ناشی از اکسایش 4-آمینوآنتی پیرین در طول موج 510 نانومتر به مدت 3 دقیقه، در حضور </span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">و فقدان تئوفیلین و تئوبرومین اندازه‌گیری می‌شود. </span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">در این مطالعه نشان داده شد که هر دو ترکیب فعالیت آنزیم پراکسیداز را مهار می‌کنند و مقادیر </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">IC₅₀</span></span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> برای</span></span> <span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">تئوبرومین و تئوفیلین به ترتیب 0/50&nbsp;و 0/55 میلی‌مولار است. از طرفی مقادیر ثابت‌های </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">K_m</span></span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> و </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">V_max</span></span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> هر یک از مهارکننده‌ها، نارقابتی بودن مکانیسم مهار را نشان می‌دهد. همچنین مقدار </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">K_i</span></span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">، برای تئوبرومین و تئوفیلین به ترتیب 0/03 و 0/045 میلی‌مولار تعیین شد. درنتیجه، تئوبرومین در مقایسه با تئوفیلین، به دلیل داشتن مقادیر کمتر </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">IC₅₀</span></span></span> <span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">و </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">K_i</span></span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">، دارای قدرت مهار بالاتر و تمایل اتصال بیشتری به کمپلکس آنزیم - پیش‌ماده است. بنابراین، نتیجه‌گیری می‌شود که تئوبرومین اثر مهاری قوی‌تری بر فعالیت پراکسیداز دارد</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">.</span></span></span><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:13.0pt;"></span></span></span></strong><br /> &nbsp;<br /> &nbsp; Peroxidase catalyzes different oxidation of substrates using hydrogen peroxide, a reactive oxygen specie (ROS). ROS, at low concentrations, act as messenger to regulate intracellular signaling, whereas, at high concentrations, they can overcome the immune system by creating oxidative stress. Some common beverages such as coffee, tea and soft drinks contain high levels of xanthine alkaloids including theophylline and theobromine. In this study, the effect of theophylline and theobromine on peroxidase activity was kinetically studied by measuring the absorption of 4-aminoantipyrine, oxidized in the presence and absence of theophylline and theobromine at 510 nm for 3 minutes. The results showed that theobromine and theophylline acted as inhibitors with IC₅₀ of 0.50 and 0.55 mM, respectively. K_m and V_max values showed that both compounds are non-competitive inhibitors. The values of K_i were calculated as 0.03 and 0.045 mM for theobromine and theophylline, respectively. Lower values of K_i and IC₅₀ for theobromine compared to theophylline indicates that theobromine has a higher inhibition strength and binding tendency to the enzyme-substrate complex. Hence, it is concluded that theobromine has a stronger inhibitory effect on POD activity.<br /> &nbsp;<br /> &nbsp; آنتی‌اکسیدان, تئوبرومین, تئوفیلین, رادیکال آزاد, مهارکننده antioxidant, free radical, inhibitor, theobromine, theophylline 279 288 http://nbr.khu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1356-1&slc_lang=fa&sid=1 Tayyebeh Rahmati darvazi طیبه رحمتی دروازی tr.darvazi@yahoo.com 10031947532846009407 10031947532846009407 Yes Department of Biology, Faculty of Science, University of Guilan, Rasht, Iran گروه زیست شناسی، دانشکده علوم، دانشگاه گیلان، رشت، ایران Reyhaneh Sariri ریحانه سریری sariri@guilan.ac.ir 10031947532846009408 10031947532846009408 No Department of Biology, Faculty of Science, University of Guilan, Rasht, Iran گروه زیست شناسی، دانشکده علوم، دانشگاه گیلان، رشت، ایران