fa تشخیص مولکولی عامل طاعون بر اساس ژن pla میکروبیولوژی Microbiology مقاله پژوهشی Original Article <div><span dir="RTL"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">یر</span></span></span><span dir="RTL"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">سینیا پستیس عامل بیماری طاعون، باسیلی گرم منفی متعلق به تیره انتروباکتریاسه است. تشخیص این ارگانیسم بر اساس روش&shy; های کلاسیک وقت گیر، پر هزینه و خطرناک است. هدف از این مطالعه طراحی روش </span></span></span><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">TaqMan Real-time PCR برای </span></span><span dir="RTL"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">تشخیص سریع این باکتری بر اساس ژن <em>pla </em>است. در این مطالعه واکنش </span></span></span><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">Real-time PCR </span></span><span dir="RTL"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">بر اساس ژن هدف <em>pla&nbsp; </em>بهینه&shy; سازی گشت. برای تعیین حساسیت، از ژن <em>pla </em>رقت&shy;های سریال تهیه و آخرین رقتی که سیگنال فلورسنت تولید کرد به عنوان کم&shy;ترین حد تشخیص در نظر گرفته شد. بر اساس نتایج آزمایش تعیین حساسیت، منحنی استاندار شامل مقادیر Ct و تعیین کمیت برای آنالیز ژن هدف استفاده گردید. </span></span></span><span dir="RTL"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">ویژگی آنالیتیکال روش به وسیله انجام آزمایش بر روی ژنوم تعدادی از باکتری&shy;های کنترل منفی ارزیابی گردید.</span></span></span> <span dir="RTL"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">در این بررسی، در نمودار تکثیر ژن <em>pla </em>هیچ گونه تکثیری برای نمونه&shy;های کنترل منفی مشاهده نشد و ویژگی واکنش تایید گشت. کم&shy;ترین حد تشخیص روش&nbsp; <span style="font-family:times new roman;">Real-time PCR </span>برای ژن هدف fg 4/5، همچنین کم&shy;ترین تعداد کپی از ژن هدف در یک واکنش 20 میکرولیتر در حدود 10³</span></span></span><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">&times;</span></span><span dir="RTL"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> 1 تعیین گشت</span></span></span><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">.</span></span><br /> <br /> <span dir="LTR">.</span></div> <em>Yersinia pestis</em>, a gram-negative rod belonging to the Enterobacteriaceae family, is the causative agent of plague. Classical methods of detecting the organisms are time-consuming, expensive and dangerous. The aim of the study was to design a Real-time PCR assay on the basis of the <em>pla </em>gene of <em>Yersinia pestis.</em> In this research the Real- time PCR test was optimized by using special primers for targeting <em>pla</em> gene. After preparing 10-fold serial dilutions of the <em>pla </em>and their analysis by the assay, the last dilution showing a fluorescent signal was confirmed as the limit of detection (LOD). A standard curve based on the Ct values was depicted, so the assay was developed to quantify the target gene. The analytical specificity was determined by subjecting the genome of some control negative bacteria to the assay. In this experiment, negative control genomes did not show detectable signals in the assay. The last dilution of <em>pla</em> plasmid which showed a fluorescent signal was 4.5 fg. So, the lower detectable copy numbers of the gene in a 20 &mu;l PCR reaction was calculated as 1&times;10³.<br /> &nbsp; ریل تایم پی سی آر, کنترل منفی, منحنی استاندارد, ویژگی, یرسینیا پستیس control negative, Real- time PCR, specificity, standard curve, Yersinia pestis 374 381 http://nbr.khu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-695-2&slc_lang=fa&sid=1 Khatereh Kabiri خاطره کبیری Kabiri.kh93@ gmail.com 10031947532846007520 10031947532846007520 Yes Department of Microbiology, North Tehran Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran گروه میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد تهران شمال، تهران، ایران Keivan Majidzadeh کیوان مجیدزاده Kabiri.kh93@ gmail.com 10031947532846007521 10031947532846007521 No Tasnim Biotechnology Research Center (TBRC), AJA University of Medical Sciences, Tehran, Iran مرکز تحقیقات زیست فن آوری تسنیم، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی آجا، تهران، ایران