fa طراحی، ساخت و تأیید مولکولی سازۀ جفتی بیان کنندۀ ژن MaSp1 و بیان گذرای آن در الیاف پنبه علوم سلولی و مولکولی Cell and Molecular Biology مقاله پژوهشی Original Article <p><span dir="RTL">پن</span><span dir="RTL">به </span>L.) <em>Gossypium hirsutum</em><span dir="RTL">) </span><span dir="RTL">از محصولات مهم زراعی دنیا است و افزایش کیفیت الیاف آن از اهمیت فراوانی در صنایع نساجی برخوردار است</span><span dir="RTL">.</span><span dir="RTL"> رشته&shy; های تار عنکبوت محکم&shy;ترین و کشسان&shy;ترین الیاف شناخته شده در طبیعت است. بدین جهت سازه&shy;ای طراحی شد تا با بیان ویژه پروتئین تار عنکبوت در الیاف پنبه منجر به افزایش کیفیت آن جهت ریسندگی شود. پس از سنتز سازۀ مورد&shy;نظر که ترکیبی از پروموتر ویژۀ بیان در فیبر پنبه</span>RD22-like1 <span dir="RTL">،</span> <span dir="RTL">توالی کوزاک مانند در گیاهان و توالی مصنوعی بر&shy;اساس </span><span dir="RTL">ژن</span> &nbsp;<em>Lh</em> Major ampullate Spidroin1 (<em>MaSp1</em>) <span dir="RTL">بود</span><span dir="RTL">،</span> <span dir="RTL">پلاسمید مورد نظر توسط دو آنزیم</span> EcoRI<span dir="RTL"> و </span>NheI&nbsp;<span dir="RTL">برش دوگانه داده شد و پس از استخراج قطعۀ مورد&shy;نظر بین جایگاه &shy;های برش </span>EcoRI<span dir="RTL"> و </span>NheI&nbsp;<span dir="RTL">دروکتور باینری </span>pCAMBIA1304<span dir="RTL"> همسانه&shy; سازی شد. پس از تراریختی </span><em>E.coli</em> DH5<em> &alpha;</em>&nbsp;<span dir="RTL">توسط این پلاسمید</span> <span dir="RTL">و استخراج آن، پلاسمید جدید </span>pCSP <span dir="RTL">نام&shy;گذاری شد. با واکنش زنجیره&shy;ای پلیمراز توسط پرایمر اختصاصی ژن مورد نظر و ژن مقاومت به هیگرومایسین و همچنین برش آنزیمی دوگانه صحت واکنش اتصال به تأیید رسید. </span><span dir="RTL">پس از تراریختی</span><em>Agrobacterium tumefaciens </em><em>LBA4404</em> <span dir="RTL">توسط </span>pCSP<span dir="RTL">، صحت تراریختی با واکنش زنجیره</span>&shy;<span dir="RTL">ای پلیمراز تأیید شد. سپس تخمک پنبه رقم ورامین توسط آن ترایخته شد و با اثبات بیان ژن </span><em>MaSp1 </em><span dir="RTL">در تخمک و الیاف پنبه در محیط در شیشه مشخص &shy;شد پروموتر </span>GaRDL1<span dir="RTL"> که متعلق به گونۀ دیگری از پنبه است به</span>&shy;<span dir="RTL">خوبی توان کنترل بیان ژن مورد نظر در الیاف پنبه را دارد و توالی ژن سنتزی بدون بهینه</span>&shy;<span dir="RTL">سازی کدون در الیاف پنبه قابل بیان می</span>&shy;<span dir="RTL">باشد.</span></p> <p>Cotton (<em>Gossypium hirsutum </em>L.) is an important crop in the world and increasing its fiber quality is very cr-ucial for textile industries. Spider silk is the strongest and most elastic fiber ever known in the nature. Cotton is one of the main&nbsp;crops in the world and increasing its fiber quality is very important for textile industries. In this regard, a synt-hetic construct has been designed&nbsp;to&nbsp;offer spider silk quality to cotton fibers by fiber-specific expression&nbsp;of Major am-pullate spidroin1 (<em>MaSp1</em>) gene under control of core sequence of GaRD22-like1 promoter. The synthetic construct was double digested by the EcoRI and NheI and sub-cloned in pCAMBIA1304 binary vector. <em>E.coli</em> DH5&alpha; was transformed using new plasmid namely pCSP. Ligation and intact backbone of plasmid was conformed using <em>MaSp1</em> and hygrom-ycin re-sistance genes specific primers and finally with EcoRI/NheI double digestion.<em> Agrobacterium tumefaciens </em>LBA4404 was transformed with pCSP to transform cotton ovules of Varamin cultivar. The expression of MaSp1 in co-tton ovules and fibers showed that this synthetic sequence had been successfully expressed under control of GaRDL1 core promoter and this construct without codon optimization could be used for cotton transformation and its fiber qual-ity manipulation.</p> اسپایدرویین, تخمک, تراریختی, برش دوگانه, پروموتر spidroin, ovule, transformation, double digestion, promote 238 248 http://nbr.khu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-81-22&slc_lang=fa&sid=1 Maryam Behnam مریم بهنام 10031947532846002095 10031947532846002095 No دانشگاه پیام نور تهران شرق Seyed Javad Davarpanah سیدجواد داورپناه 10031947532846002096 10031947532846002096 Yes دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله Ramin Karimian رامین کریمیان 10031947532846002097 10031947532846002097 No دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله