یافته های نوین در علوم زیستی

افزایش فعالیت آنزیم سلولاز در قارچ تریکودرما ویریده با القای جهش با پرتو گاما

نویسندگان

خدیجه باقری 1
سمیرا شهبازی 2
حامد عسکری 2
شیده موجرلو 3
فرنگیس امیرلو 1

1 دانشگاه زنجان

2 سازمان انرژی اتمی ایران

3 دانشگاه صنعتی شاهرود

https://doi.org/10.29252/nbr.4.4.329
چکیده
گونه ­های سرده Trichoderma ازنظرتولید سلولاز با فعالیت آنزیمی بالا بسیار شناخته شده هستند. با وجود تولید آنزیم‌های سلولازی متنوع در قارچ تریکودرما، به ­علت عمل­کرد آنزیمی پائین و هزینۀ زیاد تولید، استفاده از آنزی­م های سلولازی آنها در تبدیل زیستی پسماندهای سلولزی چندان موفقیت‌آمیز نبوده است. تحقیق حاضر با هدف دست­یابی به جدایه‌های موتانتی از گونۀ Trichodera viride با توان تولید بیشتر آنزیم سلولاز با استفاده از القای جهش با پرتو گاما انجام گرفته است. سوسپانسیون اسپور قارچ در اپتیمم دوز 250 گری تحت پرتوتابی با گاما قرار گرفت. اسپورهای جوانه ­زده به ­منظور بررسی پایداری پنج ­بار واکشت شدند و از بین آنها جدایه‌های موتانت با قابلیت اسپورزایی بهتر انتخاب شدند. فعالیت سلولازی با استفاده از سوبستراهای سلولزی کاغذ صافی واتمن شمارۀ یک، کربوکسی متیل سلولز، آویسل، سلولز باکتریایی و سلولز کلوئیدی و براساس دستورالعمل IUPAC سنجیده شد. پروفایل پروتئین‌های سلولازی جدایه‌های موتانت با آزمون SDS-PAGE بررسی شد. بیشترین فعالیت سلولاز کل و فعالیت آنزیم آویسلاز به ­ترتیب با 43/92 و 40/74 U/mg در جدایۀ موتانت M21 و بیشترین فعالیت اندوگلوکانازی در جدایۀ موتانت M18 مشاهده شد. به­ طور کلی کاربرد اشعۀ گاما در 38 درصد از جدایه­ های جهش‌یافته به افزایش معنی‌دار در فعالیت سلولازی منجر شد. همچنین، از این روش به ­منزلۀ روشی ساده و کارآمد برای دست­یابی به جدایه­ های موتانتی می­ توان استفاده کرد که­ توانایی تولید مقادیر بالای آنزیم و دیگر متابولیت ­های میکروبی را داشته باشند.

کلیدواژه‌ها

الکتروفورز
پرتوتابی
سلولز
کربوکسی متیل سلولز

عنوان مقاله English

Cellulase enzyme production enhancement in Trichoderma viride by Gamma ray induced mutation

نویسندگان English

Khadijeh Bagheri 1
Samira Shahbazi 2
Hamed Askari 2
Shide Mojerlou 3
Farangis Amirlou 1
1 Zanjan University
2 Atomic Energy Organization of Iran
3 Sharoud industrial University
چکیده English

Trichoderma species have been famous for production of cellulases with relatively high enzymatic activity. However, attempts to use their cellulolytic enzymes in the bioconversion of cellulosic wastes have not been successful because of high cost of production and low enzymatic yields. This study aimed to obtain gamma-induced mutants of T. viride with enhanced extracellular cellulase production. Spore suspensions were exposed to γ-rays at 250 Gy as optimum dose. After irradiation, all germinated spores were grown onto PDA plates and mutant strains with better sporulation were selected and subcultured five times to test their stability. Cellulase activity was tested using Whatman No. 1 filter paper, carboxymethyl cellulose, avicel, bacterial cellulose and walseth cellulose according to the IUPAC recommendation. Extracellular proteins profiles of mutant strains were studied via SDS-PAGE. The maximum activity of total cellulase and avicelase were observed in the isolate of M21 (92.43 and 74.40 U/mg, respectively) and maximum endo-glucanase activity was observed in M18 mutant. The results of this study showed that the application of gamma ray led to a significant increase in Cellulose activity of 38 percent of mutant strains. Thus, this method could be used as a simple and efficient way to achieve strains with the ability to produce high levels of enzymes and other biological metabolites.

کلیدواژه‌ها English

carboxy methyl cellulose
Cellulose
Electrophoresis
irradiation
mutation
Ahari Mostafavi, H. and Safaie, N. 2008. Application of nuclear technology in plant protection. – Zolal Kosar Publisher. Tehran. 122 pp.
Andersen, N. 2007. Enzymatic hydrolysis of cellulose: experimental and modeling studies. – Ph.D. Thesis. University of Technical, Denmark.
Awafo, V.A. 1997. Biosynthesis of cellulase system from Trichoderma reesei and its characteristics. – Ph.D. Thesis. University of McGill, Montreal, Canada.
Bradford, M.M. 1976. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein dye binding. – Anal. Biochem.72: 248-54.
Dillon, A.J.P., Camassola, M., Henriques, J.A.P., Fungaro, M.H.P., Azevedo, A.C.S., Velho, T.A.F. and Laguna, S.E. 2008. Generation of recombinants strains to cellulases production by protoplast fusion between Penicillium echinulatum and Trichoderm-aharzianum. – Enzyme Microb. Technol. 43: 403-409.
Durand, H., Clanet, M. and Tiraby, G. 1988. Genetic improvement of Trichoderma reesei for large scale cellulase production. – Enzyme Microbiol. Technol. 10: 341-346.
Ghose, T.K. 1987. Measurement of cellulase activities. – Pure Appl. Chem. 59: 257-68.
Laemmli, U.K. 1970. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. – Nature 227: 680-685.
Martins, L.F., Kolling, D., Camassola, M., Dillon, A.J.P. and Ramos, L.P. 2008. Comparison of Penicillium echinulatum and Trichoderma reesei cellulases in relation to their activity against various cellulosic substrates. – Bioresource Technol. 99: 1417-1424.
Moradi, R., Shahbazi, S., Ahari mostafavi, H., Ebrahimi, M.A., Askari, H. and Mirmajlesi, M. 2013. Inve-stigation of gamma radiation effects on morph-ological and antagonistic characteristics of Trichoder-ma harzianum. – Crop Biotech. 4: 109-117.
Muthuvelayudham, R. and Viruthagiri. T. 2006. Ferme-ntative production and kinetics of cellulose protein on Trichoderma reesei using sugarcane bagasse and rice straw. – Afr. J. Biotechnol. 5: 1873-1881.
Persson, I., Tjerneld, F. and Hahn-Hagerdahl, B. 1991. Fungal cellulytic enzyme production: a review. – Process Biochem. 26: 65-74.
Shahbazi, S., Askari, H. and Mojerlou, S. 2016. The impact of different physicochemical parameters fermentation on extracellular cellulolytic enzyme production by Trichoderma harzianum. – J. Crop Protec. 5: 397-412.
Shahbazi, S., Ispareh, Kh., Karimi, M., Askari, H. and Ebrahimi, M.A. 2014. Gamma and UV radiation induced mutagenesis in Trichoderma reesei to enhance cellulases enzyme activity. – Intl. J. Farm. Alli. Sci. 3: 543-554.
Vlasenko, E., Schülein, M., Cherry, J. and Xu, F. 2010. Substrate specificity of family 5, 6, 7, 9, 12, and 45 endoglucanases. – Bioresour. Technol. 101: 2405-2411.
Vu, V.H., Pham, T.A. and Kim, K. 2011. Improvement of fungal cellulase production by mutation and optimi-zation of solid State Fermentation. – Mycobiol. 39: 20-25.
Xu, F., Jin, H., Li, H., Tao, L., Wang, J. and Chen, S. 2011. Genome shuffling of Trichoderma viride for enhanced cellulase production. – Ann. Microbiol. 5: 176-191.
Zhang, Y.H.P. and Lynd, L.R. 2004. Toward an aggregated understanding of enzymatic hydrolysis of cellulose: noncomplexed cellulase systems. – Biote-chnol. Bioeng. 88: 797-824.

  • تاریخ دریافت 18 خرداد 1405
  • تاریخ انتشار 18 خرداد 1405

صفحه اصلی

راهنمای نویسندگان

ارسال مقاله

داوران

تماس با ما