دوره 3، شماره 3 - ( 9-1395 )                   جلد 3 شماره 3 صفحات 258-268 | برگشت به فهرست نسخه ها


XML English Abstract Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Rezaee M, Baghbani Arani F, Arabi Mianroodi R. Point mutation in am-ino acid 263 of streptokinase gene as well as cloning and expression of the cysteine containing mutated protein. nbr. 2016; 3 (3) :258-268
URL: http://nbr.khu.ac.ir/article-1-2689-fa.html
رضایی مهسا، باغبانی آرانی فهیمه، عربی میانرودی رضا. ایجاد جهش نقطه ای در اسید آمینۀ 263 ژن استرپتوکیناز و کلونینگ و بیان پروتئین جهش یافتۀ حاوی سیستئین. یافته های نوین در علوم زیستی. 1395; 3 (3) :258-268

URL: http://nbr.khu.ac.ir/article-1-2689-fa.html


انستیتو پاستور
چکیده:   (1685 مشاهده)

استرپتوکیناز یکی از شناخته ­شده ­ترین عوامل ترومبولیتیک با مصرف بالینی گسترده است. با وجود این، کاربرد آن به­ دلیل ایمونوژن بودن، ایجاد عوارض هموراژیک و نیمۀ­عمر نسبتاً کوتاه، همراه با خطرهایی است. پگیلاسیون اختصاصی بر روی اسیدآمینۀ سیستئین، تکنیکی مفید جهت کاهش بسیاری از این عوارض است. هدف از مطالعۀ حاضر، طراحی و تولید مولکول استرپتوکیناز جهش ­یافتۀ حاوی سیستئین است که برای پگیلاسیون اختصاصی قابل­ استفاده باشد. اسیدگلوتامیک 263 استرپتوکیناز، که یک اسیدآمینۀ سطحی در ساختار پروتئین استرپتوکیناز است، برای انجام جهش و تعویض با سیستئین انتخاب­شد. برای نیل به این هدف، با به­ کارگیری روش SOEing PCR، جهش بر روی کدون GLU263 ژن استرپتوکیناز برای تبدیل به کدون سیستئین انجام شد. سپس، ژن استرپتوکیناز دست ­نخورده و جهش­ یافته در وکتور بیانی pET-26b (+) وارد شدند. ساختارهای حاصل درون اشریشیا کلی Rosetta (DE3) ترنسفرم شده و توسط القا با IPTG بیان شدند. درنهایت، تولید پروتئین­ ها به­ وسیلۀ آزمون­ های   SDS-PAGE و وسترن بلاتینگ تأیید شد. پروتئین­ ها به­ وسیلۀ افینیتی کروماتوگرافی با ستون Ni-NTA agarose در شرایط دناتوره با اوره تخلیص شدند و برای حذف اوره و تاخوردگی مجدد پروتئین­ ها از فیلتراسیون ژلی با سفادکس  G-25استفاده شد. نتایج این مطالعه نشان داد که با استفاده از وکتور و میزبان مذکور ژن جهش­ یافتۀ حاوی کدون سیستئین به­ خوبی بیان می ­شود و برای پگیلاسیون اختصاصی مناسب خواهد بود.

متن کامل [PDF 572 kb]   (394 دریافت)    
نوع مطالعه: مقاله پژوهشی | موضوع مقاله: ژنتیک
دریافت: ۱۳۹۴/۱۱/۲۷ | پذیرش: ۱۳۹۵/۶/۱۴ | انتشار: ۱۳۹۵/۹/۱۵

ارسال نظر درباره این مقاله : نام کاربری یا پست الکترونیک شما:
کد امنیتی را در کادر بنویسید

کلیه حقوق این وب سایت متعلق به سامانه نشریات علمی یافته های نوین در علوم زیستی است.

طراحی و برنامه نویسی : یکتاوب افزار شرق

© 2015 All Rights Reserved | Nova Biologica Reperta

Designed & Developed by : Yektaweb